非特異性背景染色的常見問題和解決辦法
常見問題 解決辦法
操作過程中漂洗不充分 每步步驟后沖洗3次，每次5分鐘
加試劑后切片干燥 防止切片干燥
組織切片折疊 勿取折疊處觀察染色結(jié)果
組織中所含過氧化物酶未阻斷 可再配制新鮮3％H20：封閉，孵育時(shí)間延長(zhǎng)
組織中所含內(nèi)源性生物素未封閉 使用阻斷劑阻斷內(nèi)源性生物素
組織抗原 彌散 組織及時(shí)固定，固定液要符合標(biāo)準(zhǔn)
切片黏附劑過厚 重新配制黏附劑涂片
血清蛋白封閉不充分 延長(zhǎng)血清蛋白封閉時(shí)間或再次用2％BSA封閉
染色過強(qiáng)
染色過強(qiáng)的常見問題和解決辦法
常見問題 解決辦法
一抗?jié)舛冗^高或抗體孵育時(shí)間過長(zhǎng) 降低一抗?jié)舛然蚩s短一抗孵育時(shí)間
孵育溫度過高，超過37℃ 蛋白 一般室溫20～28℃
生物素化二抗或SABC-POD孵育時(shí)間過長(zhǎng) 縮短孵育時(shí)間
DAB顯色時(shí)間過長(zhǎng)或DAB濃度過高 顯色時(shí)間不能超過5―10分鐘，以顯微鏡下觀察為準(zhǔn)
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