配置緩沖液的方法與技巧
更新時間：2023-08-29 點擊次數：1349次
今天，艾偉拓團隊要向您推薦一款操作簡便且復現性較好的緩沖液配制方法：
使用氨丁三醇（Tris）及鹽酸氨丁三醇（Tris-HCl）固體粉末進行配制。
Tris緩沖體系被廣泛應用生物制劑研發與生產過程中，例如目前已上市的兩款mRNA xin'guan疫苗均選用Tris/Tris-HCl作為其制劑緩沖體系，此外該緩沖體系還廣泛用于抗體蛋白純化等生物制劑生產環節。
使用時，可根據目標濃度及pH，計算并直接稱取兩種固體粉末混合，溶解定容，至于兩種固體粉末的用量如何確認，您可以參考以下實驗步驟以及艾偉拓實驗室實測值，通過一個簡單的預實驗進行確認：
1. 分別配制目標濃度的Tris與Tris-HCl（這里以0.1mol/L為例）
2.兩種溶液分別取不同體積混合成相同體積（這里以100mL為例）的緩沖液，測定溶液pH
待摸索出兩種溶液適宜比例后，根據計劃配置的緩沖液體積，倒算兩種固體粉末的用量。
基于該方法，我們復現了Moderna的新冠mRNA疫苗中的Tris緩沖溶液，pH理論值為7~8，實測值為7.47（注：該實測值為溶液中僅包含Tris/Tris-HCl，不含mRNA-LNP及其他輔料情況下的pH值）。
該方法的優勢是操作簡便，只需稱取及溶解兩步，在外界溫度及溶液濃度相同的情況下，復現性較好，且無需使用濃鹽酸等嚴格受限的試劑。
使用該方法配置Tris/Tris-HCl緩沖液的注意事項如下：
①濃度及溫度對Tris緩沖液pH均有較大影響，建議做上述實驗時，保持與實際使用場景相同的溫度與濃度，并在配置完成后第一時間進行測量，避免二氧化碳的干擾。
②若變更使用濃度或環境溫度，需重新進行上述實驗。
③為避免Tris-HCl含量波動等因素造成配置的緩沖液pH不穩定，建議采購質量可靠的藥用級Tris及Tris-HCl產品。
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